MS培養(yǎng)基配制標準操作程序
MS培養(yǎng)基配制標準操作程序
實驗步驟
1 MS培養(yǎng)基母液的母液的配制
由于組培的植物不同，需要配制不同的培養(yǎng)基，為減少工件量，可把藥品配成濃縮液。有些微量元素和有機成分成分濃度極低，因此，先配制成母液的母液。建議濃度如下表:
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藥品名稱 |
配制的終濃度 |
配制50ml的總質(zhì)量（g） |
|
煙酸 |
0.01g/ml |
0.5 |
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VB6 |
0.1g/ml |
5 |
|
甘氨酸 |
0.2g/ml |
10 |
|
NaMoO4.2H2O |
0.05g/ml |
2.5 |
|
CuSO4.5H2O |
0.05g/ml |
2.5 |
|
KI |
0.1g/ml |
5 |
|
H3BO3 |
0.062g/ml |
3.1 |
|
MnSO4. H2O |
0.169g/ml |
8.45 |
|
ZnSO4. 7H2O |
0.172g/ml |
8.6 |
|
CoCl.6H2O |
0.05g/ml |
2.5 |
|
VB1 |
0.1g/ml |
5 |
母液的母液的配制過程:
（1）根據(jù)表中的濃度，稱取50ml體積的藥品的質(zhì)量。
（2）加入到相應的溶液中，定容至50ml。
（3） 放入密封50ml塑膠管中，-20℃保存。
2 MS培養(yǎng)基母液濃度表：
（1）MS-A（macro）：為工作液濃度的50倍
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NH4NO3 |
41.25g/500ml |
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KNO3 |
47.5g/500ml |
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MgSO4·7H2O |
9.25g/500ml |
|
KH2PO4 |
9.25g/500ml |
（2）MS-B（micro）：為工作液濃度的100倍
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H3BO3 |
0.124g/200ml |
|
MnSO4·4H2O |
0.338g/200ml |
|
ZnSO4·7H2O |
0.172g/200ml |
|
CuSO4·5H2O |
0.0005g/200ml |
|
CoCl2·6H2O |
0.0005g/200ml |
|
KI |
0.0166g/200ml |
|
Na2MoO4·2H2O |
0.005g/200ml |
（3） MS-C：為工作液濃度的100倍
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CaCl2·2H2O |
22.0g/500ml |
（4） MS-D：為工作液濃度的100倍
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煙酸 |
0.01g/200ml |
|
VB6 |
0.01g/200ml |
|
VB1 |
0.002g/200ml |
|
甘氨酸 |
0.04g/200ml |
（5）MS-E：為工作液濃度的100倍
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Na2-EDTA |
3.725g/500m |
|
FeSO4·7H2O |
2.875g/500m |
3 母液的配制
MS-A：稱取NH4NO3 41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸餾水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
MS-B：吸取母液的母液如下，蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。
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母液的母液量 |
母液終濃度 |
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H3BO3 |
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0.124g/200ml |
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MnSO4·4H2O |
|
0.338g/200ml |
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ZnSO4·7H2O |
|
0.172g/200ml |
|
CuSO4·5H2O |
|
0.0005g/200ml |
|
CoCl2·6H2O |
|
0.0005g/200ml |
|
KI |
|
0.0166g/200ml |
|
Na2MoO4·2H2O |
|
0.005g/200ml |
MS-C：稱取CaCl2·2H2O 22.0g蒸餾水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
MS-D：吸取母液的母液如下，蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.
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母液的母液量 |
母液終濃度 |
|
煙酸 |
|
0.01g/200ml |
|
VB6 |
|
0.01g/200ml |
|
VB1 |
|
0.002g/200ml |
|
甘氨酸 |
|
0.04g/200ml |
MS-E：稱取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸餾水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。
4 MS培養(yǎng)基基本工作液的配制
MS培養(yǎng)基基本工作液質(zhì)量表
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組成成分 |
數(shù)量(mg/l) |
組成成分 |
數(shù)量(mg/l) |
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NH4NO3 |
1650 |
Na2-EDTA |
37.3 |
|
KNO3 |
1900 |
FeSO4·7H2O |
27.8 |
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CaCl2·2H2O |
440 |
CuSO4·5H2O |
0.025 |
|
MgSO4·7H2O |
370 |
蔗糖 |
30 |
|
KH2PO4 |
170 |
肌醇 |
100.0 |
|
KI |
0.83 |
煙酸 |
0.5 |
|
H3BO3 |
6.2 |
鹽酸吡哆醇 |
0.5 |
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MnSO4·4H2O |
22.3 |
甘氨酸 |
2.0 |
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ZnSO4·7H2O |
8.6 |
鹽酸硫銨等 |
0.4 |
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Na2MoO4·2H2O |
0.25 |
|
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CoCl2·6H2O |
0.025 |
pH |
5.8 |
（1）配制1升工作液，燒杯中放入700ml左右的蒸餾水，按順序分別吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
（2）加入固體蔗糖30g（根據(jù)具體實驗調(diào)節(jié)濃度），溶解。
（3） 加入所需的**。定容至1000ml。
（4）0.1－1mol/l的HCl或NaOH調(diào)整pH值。
（5）如果配制固體培養(yǎng)基加入一定濃度的瓊脂。瓊脂濃度為10%～15%。
（6） 液體培養(yǎng)基可選擇高溫高壓**和過濾**2種方法。固體培養(yǎng)基采用高溫高壓**方法。倒入三角瓶等培養(yǎng)器皿中，封口**。
（7）工作液配制的注意事項:
由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，極利**和**繁殖，造成污染，影響組培的成功，一般有高溫高壓**和過濾**兩種方法。
高溫高壓**: 一般用**鍋**，注意**鍋不能裝的過滿，鍋內(nèi)保持1.1Kg/cm2的壓力,溫度120℃左右，大約15－20分鐘即可。
過濾**: 一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA、IBA、ZT等，不宜用高溫高壓法**，可用過濾**，可過濾**后再加入已高溫高壓**的培養(yǎng)基中，過濾**應在無菌室或超凈工件臺上進行，以避免污染培養(yǎng)基。
